Mais jovem de quatro filhos nascidos de Manuel Ortiz de Landázuri, um oficial do exército de carreira, e Eulogia Fernández-Heredia; um de seus irmãos é o Servo de Deus Eduardo Ortiz de Landázuri Fernández de Heredia, sua cunhada é o Servo de Deus Laura Busca Otaegui de Ortiz de Landázuri. Por causa das tarefas de seu pai, a família mudou muito para locais em Espanha e Marrocos. Ela começou a estudar química na Universidade Central de Madrid em junho de 1933, uma das cinco mulheres da classe; ela foi lembrada como uma estudante amigável, mas séria. Perdeu vários membros da família para os esquadrões de fuzilamento da Guerra Civil Espanhola. Começou a ensinar em Madrid em 1939. Após uma sensação de que ela foi chamada para uma vida mais religiosa, Guadalup se juntou ao Opus Dei em 1944, trazido ao grupo por Saint Josemaría Escrivá. Desenvolveu uma devoção à Adoração Eucarística. Ela foi atribuída ao México pelo Padre Josemaría em 5 de março de 1950 para ajudar a apresentar o Opus Dei lá. Enquanto no México, ela voltou à escola para trabalhar em direção a um doutorado em química. Ela e um amigo médico estabeleceram uma clínica móvel e foram porta a porta em bairros pobres para tratar aqueles que não podiam pagar ajuda médica. Guadalupe mudou-se para Roma, Itália em 1956 para trabalhar na administração do Opus Dei, mas uma condição cardíaca a obrigou a voltar para Madrid para a cirurgia, e manteve-a perto de lá para o resto de sua vida para o tratamento contínuo. Ela foi capaz de continuar sua educação e recebeu seu doutorado em 8 de julho de 1965. Trabalhou no Instituto Ramiro de Maeztu e na Escola de Ciências Industriais da Mulher, onde atuou como administradora por muitos anos. Guadaluped ajudou a planejar e estabelecer o Centro de Estudos e Pesquisa de Ciências Domésticas. Tudo isso foi enquanto ela continuou a trabalhar para a propagação e fortalecimento do Opus Dei. Sua condição cardíaca continuou a deteriorar-se, no entanto, e embora ela continuasse a trabalhar o mais longo possível, acabou por fazê-la.